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lysis buffer, : 465nm --> 595nm filtering 후 빛 차단하고 보관 (light sensitivity)하고,4X의 수치로 나타낸다. * 생각보다 잘 녹지 않음. 100 mM Tris Cl (pH 6.. loading buffer에는 SDS,000 rpm, 줄기 혹은 뿌리, 막자사발, 파이펫,,ip 단백질 전기영동 단백질 전기영동에 대한 자료입니다.(max에서 5분정도) ⑤ 90℃이상에서 5분정도 가열한다. Divide the solution into aliquots and store at -20℃.pre-report -Coomassie blue protein 과 결합하여 Coomasie blue 의 색이 바뀌는 성질을 이용.Date: 2004.0) + 1 mM PMSF (or 100 ug/ml) >> 250 ul 4℃ 30’ >> 12, heat plate, SDS-PAGE sample buffer, 3대1로 섞을 수 있게 만든것이 4X이다. 잔유물이 많이 생기므로 filter를 자주 갈아줄 필요가 있다.2% bromophenol blue 20% glycerol 6. ④ 원심분리를 한다.(loading buffer에 대한 total volume의 비율을 2X, 원심분리기, 이것은 phosphoric acid 에 완전히 녹은 것만 통과하고 녹지 않은 것은 걸러지기 때문에 적색을  ......

 

 

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단백질 전기영동 등록

 

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단백질 전기영동

 

단백질 전기영동에 대한 자료입니다. 전기영동[1]

 

1.Title: 단백질 전기영동(1)

2.Date: 2004.11.02

3.Object: 전기영동을 통하여 식물내의 단백질을 알아보자

4.Material & Method : 식물의 잎, 줄기 혹은 뿌리, 에펜튜브, 원심분리기, heat plate, lysis buffer, SDS-PAGE sample buffer, 파이펫, 막자사발, 얼음튜브

① 단백질을 정량할 식물의 부분을 막자사발을 이용하여 lysis buffer(1ml)와함께 갈아준다.

② 원심분리를 한다.(max5분 정도)

③ 2번의 상층액(100㎛) 을 2X SDS-PAGE sample buffer와 섞는다.

④ 원심분리를 한다.(max에서 5분정도)

⑤ 90℃이상에서 5분정도 가열한다.

⑥ 식힌다. -보관

5.Further study

-용액의 조성

1 X lysis buffer

1% NP-40

120 mM NaCl

40 mM Tris-HCl (pH8.0) + 1 mM PMSF (or 100 ug/ml)

>> 250 ul 4℃ 30’ >> 12,000 rpm, 30’

10 mM Phenylmethyl sulfonyl fluoride (PMSF); Dissolve PMSF in isopropanol at a concentration of 1.74 mg/ml (10mM). Divide the solution into aliquots and store at -20℃.

2 X SDS gel-loading buffer

protein sample을 comb으로 만든 lane에 loading할때 loading buffer와 섞은 후에 sample을 loading하게 된다. loading buffer에는 SDS, 2-mercaptoethanol, glycerol등이 들어간다. sample과 buffer를 섞을때 1대1로 섞을 수 있게 만든 것이 2X, 3대1로 섞을 수 있게 만든것이 4X이다.(loading buffer에 대한 total volume의 비율을 2X,4X의 수치로 나타낸다.

100 mM Tris Cl (pH 6.8)

200 mM dithiothreithol

4% SDS (electrophoresis grade)

0.2% bromophenol blue

20% glycerol

 

6.pre-report

-Coomassie blue

protein 과 결합하여 Coomasie blue 의 색이 바뀌는 성질을 이용. (붉은 빛 ---> 푸른 빛)

이러한 성질로 흡광도가 변하게 된다, : 465nm --> 595nm

filtering 후 빛 차단하고 보관 (light sensitivity)하고, filtering 하면 청색이 적색으로 변하여 걸러지는데, 이것은 phosphoric acid 에 완전히 녹은 것만 통과하고 녹지 않은 것은 걸러지기 때문에 적색을 나타내게 되는 것이다.

* 생각보다 잘 녹지 않음. 잔유물이 많이 생기므로 filter를 자주 갈아줄 필요가 있다.

 

 

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